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梭子蟹肌孢虫SYBR Green I实时定量PCR检测方法的建立与应用
陈甜甜, 房文红, 王元, 李新苍, 赵姝, 周俊芳
2017, 13(6): 22-29. doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2017.06.003
梭子蟹肌孢虫(Ameson portunus)是感染三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的常见病原之一,该研究以其SSU rRNA基因为靶标建立了SYBR Green I实时定量PCR检测方法。结果显示:该方法扩增效率为101.45%,检测灵敏度下限可达2.0×101 拷贝·μL-1,特异性、组内重复性和组间重复性均好。利用该荧光定量PCR方法对一批来自“牙膏病”流行区的养殖三疣梭子蟹样品进行检测,梭子蟹肌孢虫检出率为82.35%。检测结果显示,活蟹的每毫克肌肉平均带虫量大幅低于死蟹,表明该地区梭子蟹的死亡与肌孢虫的感染密切相关,而且,当梭子蟹肌孢虫载量达到1.0×109 拷贝·mg-1时三疣梭子蟹存在暴发疾病甚至死亡的风险。另外,通过对比检测发现,梭子蟹肌孢虫套式PCR方法对这批样品的检出率为64.71%,表明该研究建立的荧光定量PCR方法具有更高的灵敏度。
关键词: 梭子蟹肌孢虫, 三疣梭子蟹, 实时定量PCR方法, SYBR Green I
副溶血弧菌养殖对虾分离株耐药性及耐药基因分析
魏文娟, 赵姝, 王元, 周俊芳, 李新苍, 房文红
2020, 16(1): 9-16. doi: 10.12131/20190165
文章采用琼脂稀释法检测从养殖患病对虾中分离的36株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)对16种药物的耐药性,并用PCR法检测喹诺酮类耐药基因qnrAqnrBqnrSqnrVC,酰胺醇类耐药基因catoptrAfloRcfr,四环霉素类耐药基因tetAtetBtetM,磺胺类耐药基因sul1、sul2和sul3,氨基糖苷类耐药基因strAstrBaadAaacA,利福霉素类耐药基因arr,β-内酰胺类耐药基因blaCARB和大环内酯类耐药基因erm的携带状况,分析其耐药表型和基因型之间的相关性。结果显示,36株副溶血弧菌对β-内酰胺类药物氨苄西林耐药率最高(88.9%),其次为磺胺类药物磺胺甲噁唑(66.7%),硫酸新霉素、庆大霉素、头孢曲松和美罗培南呈现100%敏感。多重耐药副溶血弧菌比例高达61.1% (22/36),其中1株对6类抗菌药耐药。喹诺酮类耐药基因qnrVC检出率最高达72.2% (26/36);其次为氨基糖苷类耐药基因srtB,检出率58.3% (21/36);大环内酯类、利福霉素类耐药基因均未检测到。耐药基因检出率与耐药表型没有表现出一一对应的关系,提示副溶血弧菌耐药的复杂性。
关键词: 副溶血弧菌, 耐药性, 琼脂稀释法, 多重耐药, 耐药基因