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大口黑鲈源维氏气单胞菌的分离鉴定

杨超 董浚键 刘志刚 孙成飞 赵飞 叶星

杨超, 董浚键, 刘志刚, 孙成飞, 赵飞, 叶星. 大口黑鲈源维氏气单胞菌的分离鉴定[J]. 南方水产科学. doi: 10.12131/20200230
引用本文: 杨超, 董浚键, 刘志刚, 孙成飞, 赵飞, 叶星. 大口黑鲈源维氏气单胞菌的分离鉴定[J]. 南方水产科学. doi: 10.12131/20200230
Chao YANG, Junjian DONG, Zhigang LIU, Chengfei SUN, Fei ZHAO, Xing YE. Isolation and identification of Aeromonas veronii from diseased Micropterus salmoides[J]. South China Fisheries Science. doi: 10.12131/20200230
Citation: Chao YANG, Junjian DONG, Zhigang LIU, Chengfei SUN, Fei ZHAO, Xing YE. Isolation and identification of Aeromonas veronii from diseased Micropterus salmoides[J]. South China Fisheries Science. doi: 10.12131/20200230

大口黑鲈源维氏气单胞菌的分离鉴定

doi: 10.12131/20200230
基金项目: 现代农业产业技术体系建设专项资金 (CARS-46);中国水产科学研究院鳜鲈基因组学与选择技术创新团队 (2020TD23);中国水产科学研究院珠江水产研究所鳜鲈基因组学与选择技术创新团队 (2020ZJTD-02)
详细信息
    作者简介:

    杨超:杨 超 (1996—),男,硕士研究生,研究方向为水产养殖。E-mail: 812328570@qq.com

    通讯作者:

    叶 星 (1962—),女,博士,研究员,从事水产遗传育种研究。E-mail: gzyexing@163.com

  • 中图分类号: Q 939.9

Isolation and identification of Aeromonas veronii from diseased Micropterus salmoides

  • 摘要: 为探明广东省佛山市某养殖场人工养殖大口黑鲈 (Micropterus salmoides) 鱼苗出现暴发性死亡的病因,该研究对患病大口黑鲈鱼苗肝脏组织中分离的一株细菌GZXR2020进行了分子鉴定,PCR扩增获得该菌株的16S rRNA基因和gyrB基因全长序列,BLAST显示其与维氏气单胞菌 (Aeromonas veronii) 的相应序列高度同源,同源性分别高于99.5%和98.3%。根据VITEK2全自动细菌鉴定系统45个理化项目的鉴定结果、羊血琼脂平板溶血实验呈β-溶血的结果,进一步通过毒力基因检测并结合补充理化鉴定结果,可判断此分离菌株为维氏气单胞菌温和生物型 (A. veronii bv. sobria)。人工回归感染实验采用高、中、低3种菌液浓度 (3×107、1.5×108和3×108 CFU·mL−1) 进行腹腔注射攻毒,可分别导致7%、40%和100%的死亡率,证实维氏气单胞菌温和生物型是引起此次大口黑鲈暴发性死亡的致病原。药物敏感性实验显示,在所检测的17种抗菌药物中,该菌株对大观霉素、氟罗沙星、氟苯尼考等7种药物敏感。
  • 图  1  人工感染后大口黑鲈出现的症状

    a. 鳞片脱落、尾鳍基部出血;b. 病鱼肝脏、脾脏与肾脏肿大

    Figure  1.  Symptoms of M. salmoides after artificial infection

    a. Scale exfoliation, bleeding of the base of caudal fin; b. Swelling of liver, spleen and kidney of the infected fish

    图  2  根据细菌16S rRNA基因序列 (a) 与gyrB基因序列 (b) 构建的系统进化树

    Figure  2.  Phylogenetic trees constructed based on sequences of 16S rRNA (a) and gyrB (b)

    图  3  分离菌株GZXR2020在羊血琼脂板上的β-溶血环

    a. 分离菌株GZXR2020;b. 大肠杆菌;标尺显示单菌落直径

    Figure  3.  Beta hemolysis of isolated strain GZXR2020 on sheep blood agar

    a. Isolated strain GZXR2020; b. E.coli. The bar shows the single colony diameter.

    表  1  分离菌株GZXR2020对17种抗菌药物的敏感性

    Table  1.   Antibiotic sensitivities of isolated strain GZXR2020

    抗菌药物
    Antibiotic
    抑菌圈直径
    Inhibition
    zone/mm
    药物敏感性
    Antibiotic
    sensitivity
    大观霉素 Spectinomycin 36 S
    卡那霉素 Amikacin 17 I
    链霉素 Streptomycin 12 I
    妥布霉素 Tobramycin 12 R
    罗红霉素 Roxithromycin 14 R
    乙酰螺旋霉素 Acetylspiramycin 21 R
    磺胺异噁唑 Sulfisoxazole 16 R
    复方新诺明 Cotrimoxazole 21 R
    氟罗沙星 Fleroxacin 23 S
    利福平 rifampicin 19 S
    氟苯尼考 Florfenicol 30 S
    阿莫西林 Amoxicillin 8 R
    青霉素 Penicillin 13 R
    氨苄西林 Ampicillin 13 R
    四环素 Tetracycline 25 S
    多西环素 doxycycline 24 S
    头孢氨苄 Cefalexin 18 S
    注:R. 耐药;I. 中等敏感;S. 敏感 Note: R. Low or no sensitivity; I. Moderate sensitivity; S. High sensitivity
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    表  2  分离菌株GZXR2020的生化鉴定结果

    Table  2.   Biochemical identification results of strain GZXR2020

    测定项目 Determination itemGZXR2020 测定项目 Determination itemGZXR2020
    丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸芳胺酶 Alanine-phenylalanine-proline aromatase + 蔗糖 Sucrose +
    谷氨酸-甘氨酸-精氨酸芳胺酶 Glutamic acid-glycine-arginine aromatase + D-塔格糖 D-tagatose
    吡咯烷基芳胺酶 Pyrrolidine arylaminase D-海藻糖 D-trehalose +
    L-阿拉伯醇 L-arabinol 柠檬酸盐(钠) Citrate (sodium)
    D-纤维二糖 D-cellobiose 丙二酸盐 Malonate
    β -半乳糖苷酶 β-galactosidase + 5-酮-葡萄糖苷 5-Keto-glucoside
    H2S产生 H2S production 乳酸盐产碱 Alkali production by lactate
    β-N-乙酰葡萄糖苷酶 β-N-acetyl glucosidase + α-葡萄糖 α-glucose
    谷氨酰芳胺酶 Glutamyl aromatase 琥珀酸盐产碱 Alkali production by succinate +
    D-葡萄糖 D-glucose + N-乙酰- β-半乳 N-acetyl-β-galactosaminase
    γ-谷氨酰转移酶 γ-glutamyltransferase α-半乳糖苷酶 α-galactosidase
    葡萄糖发酵 Glucose fermentation + 磷酸酶 Phosphatase
    β-葡萄糖苷酶 β-glucosidase 氨基乙酸芳胺酶 Aminoacetic acid arylamidase
    D-麦芽糖 D-maltose + 鸟氨酸脱羧酶 Ornithine decarboxylase
    D-甘露醇 D-mannitol + 赖氨酸脱羧酶 Lysine decarboxylase
    脱羧酶阴性控制 Decarboxylase negative control D-甘露糖 D-mannose +
    β-木糖苷酶 β-xylosidase 组氨酸同化 Histidine assimilation +
    β-丙氨酸芳胺酶 β-alanine aromatase β-葡萄糖苷酸酶 β-glucosidase
    L-脯氨酸芳胺酶 L-proline aromatase + 0/129耐受 0/129 Resistance +
    脂酶 Lipase L-苹果酸盐同化 L-malate assimilation
    酪氨酸芳胺酶 Tyrosine aromatase + L-乳酸盐同化 L-lactate assimilation
    侧金盏花醇 Adonitol D-山梨醇 D-sorbitol
    古老糖 Palatinose
    注: +. 阳性;−. 阴性 Note: +. Positive; −. Negative
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-11-04
  • 修回日期:  2020-12-09
  • 网络出版日期:  2021-04-14

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