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基于鲤疱疹病毒3型ORF65基因的DNA疫苗对建鲤鱼苗的免疫保护研究

李盈 刘振兴 马艳平 曹俊明 马江耀 郝乐 梁志凌 柯浩 李玉谷

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基于鲤疱疹病毒3型ORF65基因的DNA疫苗对建鲤鱼苗的免疫保护研究

    作者简介: 李盈(1992—),女,硕士研究生,从事动物解剖与组织胚胎学研究。E-mail: liyingzp93@163.com;
    通讯作者: 刘振兴, liuzhenxing@gdaas.cn ; 李玉谷, liyugu@scau.edu.cn
  • 中图分类号: S 943

Protection of Jian carp with immunization of CyHV-3 ORF65 DNA vaccine

    Corresponding author: Zhenxing LIU, liuzhenxing@gdaas.cn ;Yugu LI, liyugu@scau.edu.cn
  • CLC number: S 943

  • 摘要: 为开发针对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)又称为锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)DNA疫苗,该研究将CyHV-3 ORF65插入pEGFP-N1,构建pEGFP-ORF65重组质粒,通过转染实验与活体成像实验证实pORF65-EGFP融合蛋白可以在建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)体外、体内表达;重组质粒按照3 μg·尾−1的剂量尾柄肌肉注射免疫10 g左右的建鲤鱼苗,免疫3次,ELISA检测表明pEGFP-ORF65免疫后可以显著提高血清特异性抗体水平;攻毒实验显示,CyHV-3攻毒21 d后,PBS组、pEGFP-N1组和pEGFP-ORF65组的建鲤成活率分别为25%、30%和90%,攻毒建鲤的成活率显著提高(P<0.01)。该研究为ORF65作为DNA疫苗靶基因应用于CyHV-3的防控提供了依据。
  • 图 1  重组质粒pEGFP-ORF65在CCB-J细胞中的表达

    Figure 1.  Expression of pORF65-EGFP fusion protein in CCB-J

    图 2  重组质粒pEGFP-ORF65在建鲤尾柄中的表达

    Figure 2.  Expression of pORF65-EGFP fusion protein in caudal peduncle

    图 3  建鲤血清抗CyHV-3 pORF65特异性抗体水平检测

    Figure 3.  Detection of anti-CyHV-3 pORF65 antibody in Jian carp serum after immunization of PBS, pEGFP-N1, pEGFP-ORF65

    图 4  CyHV-3攻毒后的免疫建鲤成活率曲线

    Figure 4.  Survival of Jian carps immunized with PBS, pEGFP-N1 and pEGFP-ORF65 post CyHV-3 infection

    图 5  CyHV-3检测结果

    Figure 5.  Detection of CyHV-3 DNA by PCR

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出版历程
  • 收稿日期:  2019-02-19
  • 录用日期:  2019-03-28
  • 网络出版日期:  2019-05-07

基于鲤疱疹病毒3型ORF65基因的DNA疫苗对建鲤鱼苗的免疫保护研究

    作者简介:李盈(1992—),女,硕士研究生,从事动物解剖与组织胚胎学研究。E-mail: liyingzp93@163.com
    通讯作者: 刘振兴, liuzhenxing@gdaas.cn
    通讯作者: 李玉谷, liyugu@scau.edu.cn
  • 1. 华南农业大学兽医学院,广东 广州 510642
  • 2. 广东省农业科学院动物卫生研究所,广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站,广东 广州 510640
  • 3. 广东海洋大学,广东 湛江 524088

摘要: 为开发针对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)又称为锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)DNA疫苗,该研究将CyHV-3 ORF65插入pEGFP-N1,构建pEGFP-ORF65重组质粒,通过转染实验与活体成像实验证实pORF65-EGFP融合蛋白可以在建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)体外、体内表达;重组质粒按照3 μg·尾−1的剂量尾柄肌肉注射免疫10 g左右的建鲤鱼苗,免疫3次,ELISA检测表明pEGFP-ORF65免疫后可以显著提高血清特异性抗体水平;攻毒实验显示,CyHV-3攻毒21 d后,PBS组、pEGFP-N1组和pEGFP-ORF65组的建鲤成活率分别为25%、30%和90%,攻毒建鲤的成活率显著提高(P<0.01)。该研究为ORF65作为DNA疫苗靶基因应用于CyHV-3的防控提供了依据。

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