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2株乳酸菌抑菌作用研究及安全性评价

陈凯 朱璐丹 谭宏亮 黄东宇 习丙文 潘良坤 谢骏

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2株乳酸菌抑菌作用研究及安全性评价

    作者简介: 陈 凯(1990—),男,硕士研究生,从事水产动物病害学研究。E-mail: kaiaitg2009@163.com;
    通讯作者: 谢骏, xiej@ffrc.cn
  • 中图分类号: S 917.1

Bacteriostasis and safety evaluation of two lactic acid bacteria

    Corresponding author: Jun XIE, xiej@ffrc.cn
  • CLC number: S 917.1

  • 摘要: 该研究利用无菌操作技术对2株乳酸菌[乳酸菌S60 (干酪乳杆菌Lactobacillus casei) 和S72 (植物乳杆菌Lactobacillus plantarum)]展开了常规生化检测、药敏实验、体外抑菌实验以及动物实验,验证了其作为渔用益生菌的可行性和安全性。结果显示,2株乳酸菌均能在pH为4.5和0.1%的胆盐环境中存活,对水产动物常见病原菌嗜水气单胞菌 (Aeromonas hydrophila) 等均有一定的抑制作用,且抑菌物质分析结果显示其有效抑菌物质与其代谢过程中产生的有机酸类相关。安全性评价实验结果显示2株乳酸菌无分解明胶和溶血的能力。死亡统计和血液生化指标结果显示高达1.0×109 CFU·mL−1的活菌腹腔注射攻毒并未引起实验鱼类的严重死亡和机体损伤。可见2株乳酸菌作为口服益生菌具有较高的安全性。而耐药特性研究表明,2株乳酸菌对所用药物中的氨基糖苷类和磺胺甲唑耐受能力强,对氨苄青霉素、恩诺沙星、氟苯尼考和多西环素敏感。因此,2株乳酸菌的应用需要注意管理过程中药物的选择。
  • 图 1  生长曲线

    Figure 1.  Growth curve

    图 2  2株乳酸菌的产酸能力

    Figure 2.  Acid production of two strains of lactic acid bacteria

    图 3  2株乳酸菌在血平板上的溶血表现

    Figure 3.  Hemolysis activity of two strains of lactic acid bacteria on blood plate

    图 4  2株乳酸菌的溶血能力

    Figure 4.  Hemolytic activity of two strains of lactic acid bacteria

    图 5  2株乳酸菌分解明胶的能力

    Figure 5.  Gelatinolytic activity of two strains of lactic acid bacteria

    图 6  细菌感染实验

    Figure 6.  Artificial infection experiment

    表 1  乳酸菌对酸、胆盐的耐受能力

    Table 1.  Acid and bile tolerance of two strains of lactic acid bacteria

    pHS60S72胆盐/%
    bile salt
    S60抑菌圈直径/mm
    inhibition zone diameter
    S72抑菌圈直径/mm
    hibition zone diameter
    3.50 8 8
    4.5++0.1% 8 8
    5.5++0.2%1212
    7.4++0.3%1516
    0.5%1919
    注:−. 无菌生长;+. 有菌生长
    Note: −. bacteria can not growth; +. bacteria can growth.
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    表 2  乳酸菌对鱼源致病菌的抑菌活性

    Table 2.  Antimicrobial activity of two strains of lactic acid bacteria against six fish pathogens

    致病菌
    pathogens
    抑菌圈直径 inhibition zone diameter
    S60S72
    嗜水气单胞菌 A. hydrophila26.88±2.43b24.9±1.48C
    维氏气单胞菌 A. veronii28.85±2.45b28.25±2.46B
    创伤弧菌 V. vulnificus33.87±1.96a35.6±1.07A
    无乳链球菌 S. agalactiae8.33±2.38d9.7±0.96E
    副溶血弧菌 V. parahemolyticus15.23±0.78c13.1±1.82D*
    迟缓爱德华氏菌 E.tarda9.23±2.42d13.05±1.92D*
    注:不同大小写字母分别表示2株乳酸菌分别针对不同病原菌的抑菌能力的差异显著 (P<0.05);*. 2株乳酸菌对同一病原菌的抑菌能力差异显著 (P<0.05)
    Note: Different letters indicate statistical difference in bacteriostatic ability of the same lactobacillus strain among different pathogenic bacteria (P<0.05); *. statistical difference in bacteriostatic ability of different lactobacillus strains on the same pathogenic bacteria (P<0.05)
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    表 3  2株乳酸菌的耐药特性

    Table 3.  Results of antibiotic susceptibility test of two strains of lactic acid bacteria

    菌株
    bacterial strain
    S60药物质量浓度/μg·mL−1
    drug concentration
    S72药物质量浓度/μg·mL−1
    drug concentration
    抑菌圈直径/mm inhibition zone diameter256128643216256128643216
    氨苄青霉素 ampicillin 30 26242017 40 35323028
    硫酸卡那霉素 kanamycin 8 8 8 8 8 11 8 8 8 8
    链霉素 streptomycin 8 8 8 8 8 12 9 8 8 8
    恩诺沙星 enoxacin 26 21191710 19 1613 8 8
    氟苯尼考 flufenicol 32 29262015 34 29252418
    盐酸多西环素 doxycycline 37 34282421 34 28242116
    磺胺甲唑 sulfamethoxazole 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8
    生理盐水 physiological saline 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8
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    表 5  2株乳酸菌对鲫血液生化指标的影响

    Table 5.  Effects of two strains of lactic acid bacteria on blood biochemical index of C. auratus challenged with two lactic acid bacteria

    项目 index对照组 controlS60组S72组嗜水气单胞菌组 A.h
    谷丙转氨酶 ALT6.39±1.946.19±3.244.96±1.844.21±1.19
    谷草转氨酶 AST323.52±65.91321.44±105.27391±133.81330.55±118.34
    乳酸脱氢酶 LDH116.53±38.9788.54±43.3965.14±37.2673.35±31.90
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出版历程
  • 收稿日期:  2019-01-14
  • 录用日期:  2019-04-10
  • 网络出版日期:  2019-06-13

2株乳酸菌抑菌作用研究及安全性评价

    作者简介:陈 凯(1990—),男,硕士研究生,从事水产动物病害学研究。E-mail: kaiaitg2009@163.com
    通讯作者: 谢骏, xiej@ffrc.cn
  • 1. 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室,无锡 214081
  • 2. 上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306
  • 3. 南京农业大学无锡渔业学院,无锡 204182

摘要: 该研究利用无菌操作技术对2株乳酸菌[乳酸菌S60 (干酪乳杆菌Lactobacillus casei) 和S72 (植物乳杆菌Lactobacillus plantarum)]展开了常规生化检测、药敏实验、体外抑菌实验以及动物实验,验证了其作为渔用益生菌的可行性和安全性。结果显示,2株乳酸菌均能在pH为4.5和0.1%的胆盐环境中存活,对水产动物常见病原菌嗜水气单胞菌 (Aeromonas hydrophila) 等均有一定的抑制作用,且抑菌物质分析结果显示其有效抑菌物质与其代谢过程中产生的有机酸类相关。安全性评价实验结果显示2株乳酸菌无分解明胶和溶血的能力。死亡统计和血液生化指标结果显示高达1.0×109 CFU·mL−1的活菌腹腔注射攻毒并未引起实验鱼类的严重死亡和机体损伤。可见2株乳酸菌作为口服益生菌具有较高的安全性。而耐药特性研究表明,2株乳酸菌对所用药物中的氨基糖苷类和磺胺甲唑耐受能力强,对氨苄青霉素、恩诺沙星、氟苯尼考和多西环素敏感。因此,2株乳酸菌的应用需要注意管理过程中药物的选择。

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