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斑节对虾Pellino基因的克隆及其在不同胁迫条件下的表达分析

丁阳阳 江世贵 李运东 杨其彬 姜松 杨丽诗 黄建华 周发林

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斑节对虾Pellino基因的克隆及其在不同胁迫条件下的表达分析

    作者简介: 丁阳阳(1993—),男,硕士研究生,从事水产动物遗传育种与分子生物学研究。E-mail: 453806256@qq.com;
    通讯作者: 周发林, zhoufalin@aliyun.com
  • 中图分类号: S 917.4

Molecular cloning and expression analysis of Pellino in black tiger shrimp (Penaeus monodon) under different stress

    Corresponding author: Falin ZHOU, zhoufalin@aliyun.com
  • CLC number: S 917.4

  • 摘要: Pellino蛋白家族,是一类高度保守的E3泛素连接酶,在泛素化和先天性免疫中发挥重要的作用。该研究通过RACE技术得到斑节对虾(Penaeus monodon)泛素连接酶Pellino基因的cDNA全长。该基因序列全长1 961 bp,编码区序列长为1 299 bp,编码432个氨基酸,5ʹ非编码区(UTR)为89 bp,3ʹUTR为573 bp。通过qRT-PCR技术,研究了PmPellino基因在斑节对虾不同组织中的表达水平,并研究了其在不同浓度氨氮胁迫下和在不同微生物刺激下的表达情况。结果显示,PmPellino基因在各组织中均有表达,在鳃组织中表达量最高。急性氮氮胁迫后,PmPellino在肝胰腺中的表达量显著上调(P<0.01),但在鳃中的表达被抑制(P<0.01)。哈维氏弧菌可显著激活PmPellino在鳃中的表达,抑制其在肝胰腺中的表达。鳗弧菌可显著抑制PmPellino在肝胰腺中的表达,而PmPellino在鳃中的表达与对照组无显著差异。金黄色葡萄球菌可以显著激活PmPellino在肝胰腺和鳃中的表达。结果表明PmPellino可以激活免疫应答通路,在免疫防御中发挥重要的作用。
  • 图 1  PmPellino cDNA序列及其氨基酸序列

    Figure 1.  Nucleotide and deduced amino acid sequence of PmPellino

    图 2  PmPellino和其他物种Pellino氨基酸序列多重比对

    Figure 2.  Multiple alignment of deduced amino acid sequences of PmPellino from P. monodon and other species

    图 3  PmPellino系统进化树

    Figure 3.  Phylogenetic analysis of PmPellino

    图 4  PmPellino在各组织中的表达

    Figure 4.  Relative expression of PmPellino in different tissues

    图 5  急性氨氮胁迫后PmPellino在肝胰腺(a)、鳃(b)中的相对表达量

    Figure 5.  Relative expression level of PmPellino in hepatopancreas (a) and gill (b) after acute ammonia nitrogen stress

    图 6  不同微生物刺激后PmPellino在肝胰腺(a)、鳃(b)中的相对表达量

    Figure 6.  Relative expression level of PmPellino in hepatopancreas (a) and gill (b) after being challenged with different kinds of microorganism

    表 1  实验所用引物及其序列

    Table 1.  Primers and sequences used in this study

    引物名称
    primer name
    引物序列
    primer sequence
    ORF-F 5'-ATGCCCGACCCTCCTATAATTGA-3'
    ORF-R 5'-TCAGTCGCAGTTGTCTTGAAAAATG-3'
    PmPellino 3’RACE1 5'-CAGGCATCTGGAGGGAAGTGTCGG-3'
    PmPellino 3’RACE2 5'-GCAGCCTGTAGTGTATCTGAACTGTGGC-3'
    PmPellino 5’RACE1 5'-TTCGCACCACATAATGCCGAGCAGG-3'
    PmPellino 5’RACE2 5'-TGGCGTCTGTGCAACACAAACTTGC-3'
    Pellino-qF 5'-AAGCGGTGATTGTGGAGTAT-3'
    Pellino-qR 5'-AGTGGTGCGAGTTGTTCT-3'
    EF-1α-F 5'-ATTGGAGGTATTGGAACAGTGCC-3'
    EF-1α-R 5'-TCGGTAAGAGCTTCGTGGTGC-3'
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    [19] 张加润江世贵林黑着黄忠牛津黄建华王芸 . 不同品牌饲料对斑节对虾生长及水质影响的研究. 南方水产科学, doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2013.06.004
    [20] 戴文婷傅明骏赵超周发林杨其彬王艳史进选邱丽华 . 斑节对虾CDK2基因全长cDNA克隆及表达分析. 南方水产科学, doi: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.02.001
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出版历程
  • 收稿日期:  2018-09-27
  • 录用日期:  2018-12-10
  • 网络出版日期:  2019-02-18

斑节对虾Pellino基因的克隆及其在不同胁迫条件下的表达分析

    作者简介:丁阳阳(1993—),男,硕士研究生,从事水产动物遗传育种与分子生物学研究。E-mail: 453806256@qq.com
    通讯作者: 周发林, zhoufalin@aliyun.com
  • 1. 中国水产科学研究院南海水产研究所深圳试验基地,广东 深圳 518121
  • 2. 上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306
  • 3. 中国水产科学研究院南海水产研究所,农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室,广东 广州 510300

摘要: Pellino蛋白家族,是一类高度保守的E3泛素连接酶,在泛素化和先天性免疫中发挥重要的作用。该研究通过RACE技术得到斑节对虾(Penaeus monodon)泛素连接酶Pellino基因的cDNA全长。该基因序列全长1 961 bp,编码区序列长为1 299 bp,编码432个氨基酸,5ʹ非编码区(UTR)为89 bp,3ʹUTR为573 bp。通过qRT-PCR技术,研究了PmPellino基因在斑节对虾不同组织中的表达水平,并研究了其在不同浓度氨氮胁迫下和在不同微生物刺激下的表达情况。结果显示,PmPellino基因在各组织中均有表达,在鳃组织中表达量最高。急性氮氮胁迫后,PmPellino在肝胰腺中的表达量显著上调(P<0.01),但在鳃中的表达被抑制(P<0.01)。哈维氏弧菌可显著激活PmPellino在鳃中的表达,抑制其在肝胰腺中的表达。鳗弧菌可显著抑制PmPellino在肝胰腺中的表达,而PmPellino在鳃中的表达与对照组无显著差异。金黄色葡萄球菌可以显著激活PmPellino在肝胰腺和鳃中的表达。结果表明PmPellino可以激活免疫应答通路,在免疫防御中发挥重要的作用。

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