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5种鲈形目淡水鱼肌肉脂肪酸及磷脂组成的研究

韩迎雪 林婉玲 杨少玲 李来好 黄卉 杨贤庆 王锦旭 吴燕燕 翟红蕾 郝淑贤

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5种鲈形目淡水鱼肌肉脂肪酸及磷脂组成的研究

    作者简介: 韩迎雪(1993—),女,硕士研究生,研究方向为水产品加工。E-mail: 15737935907@163.com;
    通讯作者: 李来好, laihaoli@163.com
  • 中图分类号: TS 225.2

Composition of fatty acids and phospholipids in five Perciformes freshwater fish muscle

    Corresponding author: Laihao LI, laihaoli@163.com ;
  • CLC number: TS 225.2

  • 摘要: 为研究鲈形目淡水鱼在不同科和种间脂肪酸及磷脂组成的差异,该研究以高体革䱨 (Scortum barcoo)、赤鲈(Perca fluviatilis)、梭鲈(Lucioperca lucioperca)、大口黑鲈(Micropterus salmoides)和罗非鱼(Oreochromis mossambicus)为对象,采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)、高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)对以上5种鱼肌肉中的脂肪酸与磷脂进行了分析。结果表明,5种淡水鱼肌肉中共检测出21种脂肪酸,共有的脂肪酸有8种,分别为C14:0,C16:0,C18:0,C16:1,C18:1,C18:2,C20:5和C22:6。多不饱和脂肪酸(PUFA)含量丰富,PUFA含量除高体革䱨为26.81%之外,其他均大于35%。5种淡水鱼肌肉中共检出6种磷脂,分别为磷脂酰乙醇胺(PE)、鞘磷脂(SM)、磷脂酰肌醇(PI)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰胆碱(PC)。5种鱼肌肉磷脂中PC含量最高,占据磷脂总量的45.84%~62.55%,PE和PI次之,PS和SM含量相对较少,仅占总磷脂的2.19%~5.27%和2.06%~3.65%。
  • 图 1  7种磷脂混合标准品的HPLC-ELSD图谱

    Figure 1.  HPLC-ELSD profile of seven phospholipid standards

    图 2  5种鲈形目淡水鱼肌肉磷脂的HPLC-ELSD图谱

    Figure 2.  HPLC-ELSD profile of phospholipid in five Perciformes freshwater fish muscle

    表 1  升温程序表

    Table 1.  Heating program

    阶段
    stage
    速率/℃·min–1
    rate
    终点温度/℃
    final temperature
    保持时间/min
    retention time
    0 110 4
    1 10 160 1
    2 4 210 3
    3 4 240 8
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    表 2  梯度洗脱表

    Table 2.  Gradient elution

    t/min 正己烷 (含0.04%三乙胺)/%
    n-hexane (contain 0.04% three ethylamine)
    异丙醇/%
    isopropanol
    13%乙酸溶液/%
    13% acetic acid solution
    0 40 57 3
    8 40 50 10
    15 40 50 10
    15.1 40 57 3
    24 40 57 3
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    表 3  5 种淡水鱼肌肉的脂质含量

    Table 3.  Contents of lipid in muscles of five freshwater fish

    鱼种
    fish species
    脂质含量
    lipid content
    大口黑鲈 M. salmonides 88.27±5.42b
    高体革䱨S. barcoo 143.84±16.14c
    赤鲈 P. fluviatilis 61.27±8.08a
    梭鲈 L. lucioperca 53.11±3.09a
    罗非鱼 O. mossambicus 61.18±0.20a
     注:同列不同小写字母表示差异显著 (P<0.05)
     Note: Different lowercase superscripts in the same column indicate significant difference (P< 0.05).
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    表 4  5 种淡水鱼肌肉脂肪酸组成及相对含量

    Table 4.  Composition and relative contents of fatty acids in muscles of five freshwater fish

    脂肪酸
    fatty acid
    罗非鱼
    O. mossambicus
    大口黑鲈
    M. salmonides
    高体革䱨
    S. barcoo
    赤鲈
    P. fluviatilis
    梭鲈
    L. lucioperca
    月桂酸 (C12:0) lauric acid 0.19±0.04 0.07±0.03
    肉豆蔻酸 (C14:0) myristic acid 2.60±0.11b 3.18±0.13c 0.70±0.05a 0.83±0.02a 0.53±0.28a
    十五烷酸 (C15:0) pentadecanoic acid 0.78±0.07 0.62±0.08
    棕榈酸 (C16:0) palmitic acid 17.19±0.49a 18.17±0.12a 25.56±1.92b 25.47±0.17b 25.92±4.34b
    十七烷酸 (C17:0) heptadecanoic acid 1.35±0.17c 0.81±0.04b 0.18±0.04a
    硬脂酸 (C18:0) stearic acid 8.32±0.23bc 9.09±0.05c 7.81±0.65b 5.59±0.23a 8.12±0.28b
    总饱和脂肪酸 ∑SFA 30.43±1.12 31.88±0.32 34.06±1.22 32.13±0.41 34.57±4.34
    十四烯酸 (C14:1) tetradecenoic acid 0.11±0.01
    棕榈油酸 (C16:1) Palmitoleic acid 6.73±0.35d 7.66±0.22e 2.33±0.18b 4.01±0.27c 1.14±0.16a
    十七烯酸 (C17:1) heptadecenoic acid 0.33±0.00 0.76±0.13
    油酸 (C18:1) oleic acid 25.45±0.65c 17.42±0.04a 36.80±1.80d 23.72±0.27bc 21.74±2.07b
    二十烯酸 (C20:1) eicosenoic acid 1.61±0.05 1.46±0.03
    总单不饱和脂肪酸 ∑MUFA 34.22±1.05c 27.3±0.43b 39.13±1.99d 27.73±0.54b 22.87±1.91a
    亚油酸 (C18:2) linoleic acid 13.67±0.42c 2.51±0.00a 11.94±0.54b 10.94±0.36b 19.77±0.60d
    亚麻酸 (C18:3) calendic acid 0.36±0.03 0.53±0.35 0.40±0.07 0.60±0.54
    二十碳二烯酸 (C20:2) eicosadienoic acid 0.97±0.07
    二十碳三烯酸 (C20:3) eicosatrienoic acid 1.44±0.08 2.11±0.57
    二十碳四烯酸 (C20:4) eicosatetraenoic acid 4.58±3.59 6.50±0.07 1.96±0.42 1.37±0.04
    二十碳五烯酸 (C20:5) eicosapentaenoic acid (EPA) 5.29±2.46bc 7.27±0.05c 2.00±0.23a 2.80±0.10ab 2.05±0.25a
    二十一碳四烯酸 (C21:4) heneicosatetraenoic acid 3.20±1.95 1.45±0.02
    二十一碳五烯酸 (C21:5) heneicosapentaenoic acid 0.83±0.02
    二十二碳六烯酸 (C22:6) docosahexenoic acid (DHA) 6.19±0.33a 22.73±0.62b 8.28±2.63a 23.81±1.07b 20.15±2.61b
    总多不饱和脂肪酸 ∑PUFA 35.35±2.17b 40.82±0.74bc 26.81±3.20a 40.14±0.94bc 42.56±2.43c
     注:−. 表示未检测到;同行不同小写字母表示差异显著 (P<0.05);后表同此
     Note: −. not detected; different lowercase superscripts in the same row indicate significant difference (P<0.05); the same case in the following tables.
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    表 5  磷脂标准曲线方程及 R2

    Table 5.  Equations and R2 values of calibration curves for phospholipid standards

    磷脂种类
    phospholipid species
    方程
    equation
    相关系数
    R2
    磷脂酰乙醇胺 PE y=59 679.1x−5 828.79 0.997
    溶血磷脂酰乙醇胺 LPE y=283 030x+4 490.18 0.991
    磷脂酰肌醇 PI y=45 988.6x−923.945 0.996
    磷脂酰丝氨酸 PS y=174 250x+2 475.06 0.994
    磷脂酰胆碱 PC y=422 685x+1 779.12 0.994
    鞘磷脂 SM y=246 526x−3 738.84 0.997
    溶血磷脂酰胆碱 LPC y=561 390x−9 140.99 0.998
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    表 6  5 种淡水鱼磷脂组成及相对含量

    Table 6.  Composition and relative content of phospholipid in five freshwater fish

    磷脂
    phospholipid
    大口黑鲈
    M. salmonides
    梭鲈
    L. lucioperca
    罗非鱼
    O. mossambicus
    赤鲈
    P. fluviatilis
    高体革䱨
    S. barcoo
    磷脂酰乙醇胺 PE 20.60±3.08a 28.39±1.55b 21.40±0.81a 30.27±0.80b 28.23±0.19b
    磷脂酰肌醇 PI 11.43±2.13ab 9.16±0.91a 11.56±0.35ab 13.41±0.11b 17.39±0.37c
    磷脂酰丝氨酸 PS 3.26±0.65b 3.45±0.21b 5.27±0.06c 2.19±0.15a 4.91±0.03c
    磷脂酰胆碱 PC 62.55±6.34c 56.94±3.18bc 57.03±0.50bc 49.71±2.01ab 45.84±0.78a
    鞘磷脂 SM 2.17±0.48a 2.06±0.52a 2.12±0.18a 2.85±0.78ab 3.65±0.58b
    溶血磷脂酰胆碱 LPC 2.63±0.90 1.59±0.16
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出版历程
  • 收稿日期:  2018-08-16
  • 录用日期:  2018-09-20
  • 网络出版日期:  2018-12-05
  • 刊出日期:  2019-02-01

5种鲈形目淡水鱼肌肉脂肪酸及磷脂组成的研究

    作者简介:韩迎雪(1993—),女,硕士研究生,研究方向为水产品加工。E-mail: 15737935907@163.com
    通讯作者: 李来好, laihaoli@163.com
  • 1. 中国水产科学研究院南海水产研究所,农业农村部水产品加工重点实验室,广东 广州 510300
  • 2. 上海海洋大学食品学院,上海 201306

摘要: 为研究鲈形目淡水鱼在不同科和种间脂肪酸及磷脂组成的差异,该研究以高体革䱨 (Scortum barcoo)、赤鲈(Perca fluviatilis)、梭鲈(Lucioperca lucioperca)、大口黑鲈(Micropterus salmoides)和罗非鱼(Oreochromis mossambicus)为对象,采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)、高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)对以上5种鱼肌肉中的脂肪酸与磷脂进行了分析。结果表明,5种淡水鱼肌肉中共检测出21种脂肪酸,共有的脂肪酸有8种,分别为C14:0,C16:0,C18:0,C16:1,C18:1,C18:2,C20:5和C22:6。多不饱和脂肪酸(PUFA)含量丰富,PUFA含量除高体革䱨为26.81%之外,其他均大于35%。5种淡水鱼肌肉中共检出6种磷脂,分别为磷脂酰乙醇胺(PE)、鞘磷脂(SM)、磷脂酰肌醇(PI)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰胆碱(PC)。5种鱼肌肉磷脂中PC含量最高,占据磷脂总量的45.84%~62.55%,PE和PI次之,PS和SM含量相对较少,仅占总磷脂的2.19%~5.27%和2.06%~3.65%。

English Abstract

  • 淡水鱼类是我国传统水产养殖品种,其历史悠久,品种繁多,蛋白质含量高且易吸收、脂肪含量低且主要由不饱和脂肪酸构成,尤其是二十二碳六烯酸(DHA)。与其他畜肉相比,淡水鱼鱼肉结缔组织较少,含水量较高,鱼肉细嫩柔软。除此之外,淡水鱼中还含有丰富的磷脂,而磷脂是生物膜的重要组成成分,也是生命的基础物质之一[1],与细胞的识别、种特异性和组织免疫功能等有着密不可分的联系[2-3],同时磷脂还是食品的重要营养成分和风味前体物质[4-5]。研究表明,磷脂具有提高记忆和免疫力等功能[6-7]。因此对淡水鱼脂肪酸及磷脂成分的分析研究具有重要的现实意义。

    目前磷脂的分析方法主要有薄层色谱法(TLC)、液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)及核磁共振光谱(NMR)分析法,这些方法多应用在海水鱼、淡水鱼鱼卵以及贝类。陈文娟[8]采用薄层色谱法测定了大黄鱼(Larimichthys crocea)鱼卵磷脂的分子种类,检测出溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰胆碱(PC)、鞘磷脂(SM)和溶血磷脂酰胆碱(LPC) 5种组分。陆丽丽等[9]采用TLC分析法,在鲤(Cyprinus carpio)、鲫(Carassius auratus)卵的总脂质中发现磷脂种类主要为磷脂酰乙醇胺(PE)和PC,且含有少量心磷脂。程新伟等[10]利用高效液相色谱法等梯度洗脱测定养殖大黄鱼各部位磷脂组分,不同部位的磷脂组成和含量均有差异。Liu等[11]利用核磁共振波谱法测定了环文蛤(Cyclina sinensis)、中华马珂蛤(Mactra chinensis)、方形马珂蛤(M. veneriformis)、文蛤(Meretrix meretrix)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)和紫石房蛤(Saxidomus purpuratus) 6种食用蛤蜊中的甘油磷脂,得出PC和PE是6种海洋蛤蜊中总磷脂的主要组分,而LPC和PI仅代表总磷脂的一小部分。薄层色谱法虽然操作简单,但人为影响大,重现性不好,分析时间较长[12]。由于淡水鱼磷脂的组分复杂,是一个极性范围较宽的混合物,而且磷脂的紫外吸收较弱,高效液相色谱通常采用的等度洗脱体系很难将磷脂的各个组分完全分离,而且分析时间较长。目前对鲈形目淡水鱼肌肉磷脂的研究报道很少。

    因此,为了提高工作效率,缩短分析时间,本文以5种鲈形目淡水鱼类为研究对象,采用氯仿-甲醇法提取脂质,气相色谱-质谱联用(GC-MS)测定脂肪酸的种类及含量,选择高效液相色谱与蒸发光散射检测器联用,采用梯度洗脱程序测定磷脂组成,并对脂肪酸和磷脂在5种鱼中进行比较研究,以期为淡水鱼肌肉脂质研究提供理论依据。

    • 罗非鱼(Oreochromis mossambicus,1.3 kg)、大口黑鲈(Micropterus salmoides,1.2 kg)、高体革䱨 (Scortum barcoo,1.5 kg)、赤鲈(Perca fluviatilis,1.1 kg)和梭鲈(Lucioperca lucioperca,1.4 kg)各8条,分别于6月和12月在广州市黄沙水产市场和佛山市水产市场进行采样;三氟化硼-甲醇溶液(14%),正己烷和异丙醇为色谱纯(上海安谱科学仪器有限公司) PE纯度>98%、LPE纯度>99%、PI纯度>98%、磷脂酰丝氨酸(PS,纯度>98%)、SM纯度≥98%、PC纯度>98%、LPC纯度>98%,2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT,纯度≥99%,美国Sigma公司);氯仿、甲醇、丙酮、氯化钠(分析纯,广州市华屿欣实验器材有限公司)。

    • 气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪(QP2010 plus,日本岛津公司);高效液相色谱(HPLC)仪(LC-20AD,日本岛津公司);蒸发光散射检测器(ELSD-LTⅡ,日本岛津公司);电子天平(上海精密科学仪器有限公司);HWS-24电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司);TDZ5-WS低速离心机(东莞布鲁斯仪器有限公司);氮吹仪(美国Organomation公司)。

    • 取罗非鱼、大口黑鲈、高体革䱨、赤鲈和梭鲈5种淡水鱼背部肌肉,用流动水冲洗后绞碎,备用。

    • 淡水鱼肌肉脂肪根据Folch等[13]的方法略作修改后进行提取。准确称取一定质量(m,g)的绞碎鱼肉于50 mL具塞离心管中,加入15 mL氯仿-甲醇(2∶1,V/V)溶液(含0.01% BHT),在冰浴条件下用高速分散均质机以10 000 r·min–1的转速匀浆2次,每次15 s,2次间隔30 s,然后用氯仿-甲醇(2∶1,V/V)溶液定容至30 mL,静置1 h后过滤,直接将滤液盛放到已知质量(M0,g)的具塞离心管中,加入1/5滤液体积的0.85%生理盐水,最后在3 000 r·min–1的条件下离心15 min[14],弃去上层水与甲醇等液体杂质,下层脂质溶液用氮气吹扫有机试剂,冷却至恒质量后称质量(M,g),得到浓缩脂质。脂质质量分数计算公式为:

    • 将1.3.2得到的浓缩脂质加入2 mL 14%三氟化硼-甲醇溶液,在60 ℃水浴中进行甲酯化反应30 min,反应结束冷却至室温,然后分别加入1 mL正己烷和蒸馏水,振荡1 min[14-15]。静置分层后吸取上层有机层,过0.22 μm尼龙滤膜后进样品瓶,直接上机用GC-MS进行分析测定。

    • GC条件[14-18]为HP-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm);进样口温度250 ℃;升温程序见表1;载气为氦气,流量为1.52 mL·min–1;采用恒线速度,分流比为1∶30;进样量为1 μL。MS条件[14]为离子源温度200 ℃;电子能量70 eV;质量扫描范围m/z 40~550;溶剂延迟时间3 min。

      阶段
      stage
      速率/℃·min–1
      rate
      终点温度/℃
      final temperature
      保持时间/min
      retention time
      0 110 4
      1 10 160 1
      2 4 210 3
      3 4 240 8

      表 1  升温程序表

      Table 1.  Heating program

    • PC、PE、PS、PI、SM、LPC和LPE标准品在配制溶液前应放置在−20 ℃的条件下储存。分别准确称取一定量的标准品,PI和LPE用氯仿溶解,其他用甲醇溶解后于棕色容量瓶中定容,配制成一定质量浓度的标准溶液,标准品溶液配好后置于4 ℃条件下避光保存,最好现配现用。将配制好的PE、LPE、PI、PS、PC、SM、LPC标准品溶液分别单独进样,记录每个标准品的出峰时间,以相对保留时间对样品中检测出的磷脂进行定性。明确各峰归属后,将各磷脂标准品按一定比例混合成不同质量浓度的标样混合物,从低浓度到高浓度多次进样,每样重复进样2次,以各标准品质量浓度为横坐标,对应峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,同时确定各组分的最适检测范围。

    • 根据磷脂不溶于丙酮的性质[19],将1.3.2得到的浓缩脂质倒入4 ℃的冷丙酮中,不断振荡搅拌,待沉淀析出后以3 000 r·min–1离心6 min,除去上清液,冷丙酮反复清洗沉淀,直至上清液无色为止[20],沉淀用氮气吹干即得淡水鱼肌肉磷脂,于–20 ℃冷冻保存,备用。取适量淡水鱼肌肉磷脂样品,按照一定的质量浓度溶解于甲醇中。HPLC进样前使用0.22 μm孔径有机相滤膜过滤进样品瓶。

    • HPLC条件[20-22]为色谱柱Chromolith® Performan-ce-Si型正相硅胶色谱柱(100 mm×4.6 mm);柱温箱温度30 ℃[23];流动相A为正己烷(含少量三乙胺),流动相B为异丙醇,流动相C为13%乙酸溶液;流动相流速为1.5 mL·min–1,进样量为20 μL。采用三元梯度洗脱,梯度洗脱程序见表2。ELSD条件是以氮气为雾化气,气体压强320 kPa,漂移管温度70 ℃[24]

      t/min 正己烷 (含0.04%三乙胺)/%
      n-hexane (contain 0.04% three ethylamine)
      异丙醇/%
      isopropanol
      13%乙酸溶液/%
      13% acetic acid solution
      0 40 57 3
      8 40 50 10
      15 40 50 10
      15.1 40 57 3
      24 40 57 3

      表 2  梯度洗脱表

      Table 2.  Gradient elution

    • 脂肪酸分析通过检索计算机NIST 0.5谱库数据库,并与MS库中的标准谱图进行比较[14-15],来确认淡水鱼的脂肪酸甲酯成分;磷脂分析按其磷脂各标准品的出峰时间确定磷脂的种类,用面积归一化法(以峰值面积的百分比表示)确定脂肪酸及磷脂的相对百分含量。每种淡水鱼肌肉样品平行测定3次,上述所有数据均用Excel 2010统计,结果以平均值±标准差( $\overline X {\text ±} {\rm SD}$ )表示,采用SPSS 22.0软件的Duncan法对不同鱼种的脂肪酸及磷脂相对百分含量进行显著性差异分析,P<0.05为差异显著,P>0.05为差异不显著。

    • 脂质是鱼肉中重要的组成部分,分为游离脂质和结合脂质。采用常规的索氏提取法只能提取游离脂质,结合脂质不能很好地提取出来,而氯仿-甲醇法可很好地将结合态脂类从组织中提出[25]。因此,本研究选择常温的氯仿-甲醇体系提取淡水鱼中的脂质,用甲醇使结合蛋白质的脂质裂开,同时加入适量的生理盐水,使样品中的多糖、氨基酸等小分子物质溶于甲醇-水相中,脂类成分则溶解于氯仿中,能更加准确地提取脂质[26]。5种鲈形目淡水鱼肌肉中的脂质含量见表3。这5种鲈形目淡水鱼每1 kg肌肉中的脂质含量为53.11~143.84 g。赤鲈、梭鲈和罗非鱼肌肉中的脂质含量间没有显著性差异,这3种鱼与大口黑鲈、高体革䱨肌肉中的脂质含量存在显著性差异(P<0.05)。

      鱼种
      fish species
      脂质含量
      lipid content
      大口黑鲈 M. salmonides 88.27±5.42b
      高体革䱨S. barcoo 143.84±16.14c
      赤鲈 P. fluviatilis 61.27±8.08a
      梭鲈 L. lucioperca 53.11±3.09a
      罗非鱼 O. mossambicus 61.18±0.20a
       注:同列不同小写字母表示差异显著 (P<0.05)
       Note: Different lowercase superscripts in the same column indicate significant difference (P< 0.05).

      表 3  5 种淡水鱼肌肉的脂质含量

      Table 3.  Contents of lipid in muscles of five freshwater fish

    • 利用气相色谱-质谱(GC-MS)对5种鲈形目淡水鱼肌肉的脂肪酸组成进行分析,结果见表4。从分析结果得出,鲈形目不同鱼种所含的脂肪酸种类和相对含量都有所差异。5种淡水鱼共检测出21种脂肪酸,其中6种饱和脂肪酸(saturated fatty acid,SFA),5种单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acid,MUFA)和10种多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)。SFA相对含量为30.43%~34.57%,MUFA相对含量为22.87%~39.13%,PUFA相对含量除高体革䱨为26.81%之外,其他均大于35%。与其他肉蛋类食品[27]相比,具有较高比例的不饱和脂肪酸。与张雪琰等[28]研究的海水鱼肉脂肪酸组成相比,多不饱和脂肪酸种类组成丰富,且多不饱和脂肪酸总的相对含量占比较高。

      脂肪酸
      fatty acid
      罗非鱼
      O. mossambicus
      大口黑鲈
      M. salmonides
      高体革䱨
      S. barcoo
      赤鲈
      P. fluviatilis
      梭鲈
      L. lucioperca
      月桂酸 (C12:0) lauric acid 0.19±0.04 0.07±0.03
      肉豆蔻酸 (C14:0) myristic acid 2.60±0.11b 3.18±0.13c 0.70±0.05a 0.83±0.02a 0.53±0.28a
      十五烷酸 (C15:0) pentadecanoic acid 0.78±0.07 0.62±0.08
      棕榈酸 (C16:0) palmitic acid 17.19±0.49a 18.17±0.12a 25.56±1.92b 25.47±0.17b 25.92±4.34b
      十七烷酸 (C17:0) heptadecanoic acid 1.35±0.17c 0.81±0.04b 0.18±0.04a
      硬脂酸 (C18:0) stearic acid 8.32±0.23bc 9.09±0.05c 7.81±0.65b 5.59±0.23a 8.12±0.28b
      总饱和脂肪酸 ∑SFA 30.43±1.12 31.88±0.32 34.06±1.22 32.13±0.41 34.57±4.34
      十四烯酸 (C14:1) tetradecenoic acid 0.11±0.01
      棕榈油酸 (C16:1) Palmitoleic acid 6.73±0.35d 7.66±0.22e 2.33±0.18b 4.01±0.27c 1.14±0.16a
      十七烯酸 (C17:1) heptadecenoic acid 0.33±0.00 0.76±0.13
      油酸 (C18:1) oleic acid 25.45±0.65c 17.42±0.04a 36.80±1.80d 23.72±0.27bc 21.74±2.07b
      二十烯酸 (C20:1) eicosenoic acid 1.61±0.05 1.46±0.03
      总单不饱和脂肪酸 ∑MUFA 34.22±1.05c 27.3±0.43b 39.13±1.99d 27.73±0.54b 22.87±1.91a
      亚油酸 (C18:2) linoleic acid 13.67±0.42c 2.51±0.00a 11.94±0.54b 10.94±0.36b 19.77±0.60d
      亚麻酸 (C18:3) calendic acid 0.36±0.03 0.53±0.35 0.40±0.07 0.60±0.54
      二十碳二烯酸 (C20:2) eicosadienoic acid 0.97±0.07
      二十碳三烯酸 (C20:3) eicosatrienoic acid 1.44±0.08 2.11±0.57
      二十碳四烯酸 (C20:4) eicosatetraenoic acid 4.58±3.59 6.50±0.07 1.96±0.42 1.37±0.04
      二十碳五烯酸 (C20:5) eicosapentaenoic acid (EPA) 5.29±2.46bc 7.27±0.05c 2.00±0.23a 2.80±0.10ab 2.05±0.25a
      二十一碳四烯酸 (C21:4) heneicosatetraenoic acid 3.20±1.95 1.45±0.02
      二十一碳五烯酸 (C21:5) heneicosapentaenoic acid 0.83±0.02
      二十二碳六烯酸 (C22:6) docosahexenoic acid (DHA) 6.19±0.33a 22.73±0.62b 8.28±2.63a 23.81±1.07b 20.15±2.61b
      总多不饱和脂肪酸 ∑PUFA 35.35±2.17b 40.82±0.74bc 26.81±3.20a 40.14±0.94bc 42.56±2.43c
       注:−. 表示未检测到;同行不同小写字母表示差异显著 (P<0.05);后表同此
       Note: −. not detected; different lowercase superscripts in the same row indicate significant difference (P<0.05); the same case in the following tables.

      表 4  5 种淡水鱼肌肉脂肪酸组成及相对含量

      Table 4.  Composition and relative contents of fatty acids in muscles of five freshwater fish

      5种淡水鱼共有的脂肪酸有8种,分别为C14:0、C16:0、C18:0、C16:1、C18:1、C18:2、C20:5和C22:6,是5种鲈形目淡水鱼肌肉的主要脂肪酸。脂肪酸组成在种类和相对含量上都存在较大差异。对于饱和脂肪酸,高体革䱨、赤鲈和梭鲈中的C14:0含量占比均小于1%,差异不显著,这3种鱼与罗非鱼和大口黑鲈在C14:0的相对含量上差异显著(P<0.05);高体革䱨、赤鲈和梭鲈中的C16:0相对含量均为25%~26%,差异不显著,而罗非鱼和大口黑鲈中的C16:0相对含量分别为17.19%和18.17%,差异也不显著;高体革䱨和梭鲈中的C18:0相对含量均在8%左右,差异不显著,与大口黑鲈、赤鲈2种鱼相对含量差异显著(P<0.05)。

      对单不饱和脂肪酸来说,C16:1的相对含量在5种鱼中存在显著性差异(P<0.05);C18:1的相对含量在罗非鱼、大口黑鲈、高体革䱨和梭鲈中存在显著性差异(P<0.05);而多不饱和脂肪酸C18:2的相对含量在高体革䱨和赤鲈中差异不显著,与其他3种鱼在相对含量上差异显著(P<0.05);高体革䱨和梭鲈中的C20:5 (EPA)相对含量均为2%,差异不显著,与罗非鱼和大口黑鲈2种鱼相对含量差异显著(P<0.05);罗非鱼和高体革䱨中的C22:6 (DHA)相对含量小于10%,差异不显著,而大口黑鲈、赤鲈和梭鲈中的C22:6 (DHA)相对含量均大于20%,差异也不显著。人体不能合成的亚油酸(n-6)、亚麻酸(n-3),鱼体内所含的EPA和DHA正好能够补充机体所需的必需脂肪酸[29],而大口黑鲈、赤鲈和梭鲈是补充DHA (C22:6)的良好食物来源。

    • 实验选用氯仿-甲醇提取样品中的脂类物质。样品中除含有磷脂外,还含有其他杂质,如甘油三酯、游离脂肪酸、胆固醇等,这些物质会对磷脂的检测产生干扰,并且有些物质会在硅胶柱上残留积累,使色谱系统的柱压升高,并降低柱效,故样品分析前需进行纯化处理,标准品和样品色谱图结果见图1图2。在本实验的洗脱条件下,标准品和5种淡水鱼样品出峰时间均可在15 min内全部完成。混合磷脂标准品的所有磷脂组分均能达到基线分离,呈现单峰,LPC呈现出2个峰,这是由于随着结构中酯基上烃基链长短和双键位置的不同,每种磷脂会存在不同分子种类或同分异构体,因而在某一色谱条件下,某一种或几种磷脂组分的色谱峰可能会出现拖尾或者肩峰,甚至分出2个或更多的峰[30],但并不影响各磷脂的分离与定量分析,计算峰面积时按2峰面积之和计算。

      图  1  7种磷脂混合标准品的HPLC-ELSD图谱

      Figure 1.  HPLC-ELSD profile of seven phospholipid standards

      图  2  5种鲈形目淡水鱼肌肉磷脂的HPLC-ELSD图谱

      Figure 2.  HPLC-ELSD profile of phospholipid in five Perciformes freshwater fish muscle

    • 实验中进样量为20 μL,在实验所选定的检测范围内,得到的各磷脂标准曲线见表5,结果均为线性关系,且相关系数R2均大于0.99。

      磷脂种类
      phospholipid species
      方程
      equation
      相关系数
      R2
      磷脂酰乙醇胺 PE y=59 679.1x−5 828.79 0.997
      溶血磷脂酰乙醇胺 LPE y=283 030x+4 490.18 0.991
      磷脂酰肌醇 PI y=45 988.6x−923.945 0.996
      磷脂酰丝氨酸 PS y=174 250x+2 475.06 0.994
      磷脂酰胆碱 PC y=422 685x+1 779.12 0.994
      鞘磷脂 SM y=246 526x−3 738.84 0.997
      溶血磷脂酰胆碱 LPC y=561 390x−9 140.99 0.998

      表 5  磷脂标准曲线方程及 R2

      Table 5.  Equations and R2 values of calibration curves for phospholipid standards

    • 利用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)对5种鲈形目淡水鱼肌肉的磷脂组成进行测定,结果见表6。5种鲈形目淡水鱼肌肉中磷脂组成成分主要有PE、PI、PS、PC、SM和LPC。在所有被检测样品中,PC都是磷脂的重要组成部分,占淡水鱼肌肉磷脂的45.84%~62.55%。PE和PI同样也占磷脂组成的很大比例,分别达到鱼肌肉磷脂的20.6%~30.27%和9.16%~17.39%。在淡水鱼肌肉磷脂中,存在一定量的PS及SM,相对含量分别为2.19%~5.27%和2.06%~3.65%。5种淡水鱼不同磷脂组分相对含量差异较大,PE、PC、SM的相对含量在大口黑鲈和高体革䱨肌肉中存在显著性差异(P<0.05);PI、PS的相对含量在梭鲈、赤鲈和高体革䱨肌肉中存在显著性差异(P<0.05);在大口黑鲈、梭鲈和高体革䱨肌肉中没有检测到LPC。5种淡水鱼肌肉中PE、PI、PC这3种常见磷脂相对含量较高,这一结果与王琦等[30]研究结果一致。PC具有预防和辅助治疗动脉硬化、改善记忆力、延缓衰老等功能[31-32];PE作为构成生物膜的重要组成部分,具有维持生物体结构和功能的作用,影响着一系列生物代谢活动,如调节血压、视觉活动等[33]。增加淡水鱼的摄入量,可平衡体内膳食脂肪酸的含量,促进生长发育,预防高血脂及与其相关的心脑血管疾病,有利于身体健康[34-35]

      磷脂
      phospholipid
      大口黑鲈
      M. salmonides
      梭鲈
      L. lucioperca
      罗非鱼
      O. mossambicus
      赤鲈
      P. fluviatilis
      高体革䱨
      S. barcoo
      磷脂酰乙醇胺 PE 20.60±3.08a 28.39±1.55b 21.40±0.81a 30.27±0.80b 28.23±0.19b
      磷脂酰肌醇 PI 11.43±2.13ab 9.16±0.91a 11.56±0.35ab 13.41±0.11b 17.39±0.37c
      磷脂酰丝氨酸 PS 3.26±0.65b 3.45±0.21b 5.27±0.06c 2.19±0.15a 4.91±0.03c
      磷脂酰胆碱 PC 62.55±6.34c 56.94±3.18bc 57.03±0.50bc 49.71±2.01ab 45.84±0.78a
      鞘磷脂 SM 2.17±0.48a 2.06±0.52a 2.12±0.18a 2.85±0.78ab 3.65±0.58b
      溶血磷脂酰胆碱 LPC 2.63±0.90 1.59±0.16

      表 6  5 种淡水鱼磷脂组成及相对含量

      Table 6.  Composition and relative content of phospholipid in five freshwater fish

      鲈形目是世界上鱼类种类最多的一个目,有150科1 367属7 800种。其形状、大小各不相同,几乎存在于所有的水生态环境中。罗非鱼属于鲈形目、鲡鱼科、罗非鱼属,食性广泛,大多以植食性为主的杂食性,最适生长温度为22~35 ℃;大口黑鲈属于鲈形目、棘臀鱼科、黑鲈属,为肉食性鱼类,最适生长温度为20~30 ℃;高体革䱨属于鲈形目、䱨科、革䱨属,为低层、杂食性鱼类,摄食能力强,最适生长温度为21~25 ℃;赤鲈和梭鲈都属于鲈形目、鲈科,赤鲈为鲈属而梭鲈为梭鲈属,赤鲈以无脊椎动物和小型鱼类为食,最适生长温度为18~24 ℃;梭鲈为冷水性、肉食性的凶猛鱼类,摄食的种类随其生活的环境而改变,最适生长温度为12~18 ℃。这些鱼类的栖息习性、食性、适应性和生长习性等都会对其脂肪酸及磷脂的种类和相对含量产生一定的影响[36]

    • 通过对5种鲈形目淡水鱼肌肉脂肪酸及磷脂的比较分析,发现5种淡水鱼肌肉中富含脂肪酸,尤其是不饱和脂肪酸,具有很高的营养价值。5种鲈形目淡水鱼肌肉饱和脂肪酸相对含量为30.43%~34.57%,单不饱和脂肪酸相对含量为22.87%~39.13%,多不饱和脂肪酸相对含量除高体革䱨为26.81%之外,其他均大于35%。鲈形目淡水鱼肌肉中磷脂种类丰富,主要由PE、PI、PC组成,还有少量的PS、SM和LPC。大口黑鲈、梭鲈和高体革䱨肌肉中磷脂较赤鲈和罗非鱼简单,未检测到LPC。本研究对5种鲈形目淡水鱼中脂肪酸和磷脂进行比较分析,以期为淡水鱼肌肉脂肪酸及磷脂营养评价和综合利用提供一定的理论依据。

参考文献 (36)

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