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维生素B2又名核黄素(riboflavin)，以磷酸酯形式作为与递氢有关的黄素酶的辅酶参与体内氧化还原反应[1]。维生素B2是动物不能自身合成的一种水溶性维生素，必须从外界食物中摄取[2]。当维生素B2摄入量过低时，鱼类会出现多种缺乏症，如食欲不振、生长不良、短小症、运动失调、体色发黑、表皮病变、生殖能力下降，有的还可导致眼睛出血、白内障和烂鳍的发生[3-5]，其共有特征为食欲不振和生长不良。目前国内外学者对水产动物维生素B2的需要量已做了大量研究，部分鱼类维生素B2需要量已被确定，如吉富罗非鱼(Oreochromis niloticusGIFT)为10.2~19.3 mg·kg–1[6]、草鱼(Ctenopharyngodon idella)为5.54~7.90 mg·kg–1[7]、鲈鱼(Lateolabrax japonicus)为4.89~6.15 mg·kg–1[8]、黄尾 (Seriola quinqueradiata)为11 mg·kg–1[9]、异育银鲫(Carassius auratus gibelio)为3.76 mg·kg–1[10]、团头鲂(Megalobrama amblycephala)为5.21 mg·kg–1[11]、杂交条纹鲈(Morone chrysops×M. saxatilis)为4.1~5.0 mg·kg–1[12]、斑点叉尾鮰 (Ictalurus punctatus)为6~9 mg·kg–1[13,14]、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)为3~15 mg·kg–1[15,16]以及幼建鲤(Cyprinus carpiovar. Jian)为5.0~5.7 mg·kg–1[17]等。
卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肉质细嫩，味道鲜美，是名贵的食用鱼类，在我国福建、广东、广西和海南等地已被规模化养殖，是海水鱼类养殖中大量使用配合饲料的为数不多的几种鱼类之一[18]。目前，国内外关于卵形鲳鲹维生素B2需要量的研究仍处于空白。本文以卵形鲳鲹为研究对象，分析了饲料中维生素B2水平对其生长性能、鱼体营养成分、血清生化、血清免疫指标和肝脏维生素B2含量及肝脏D-氨基酸氧化酶(D-AAO)活性的影响，旨在探讨卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B2的需要量。
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主要以酪蛋白(不含维生素)、鱼粉和大豆浓缩蛋白作为蛋白质源，鱼油及大豆卵磷脂作为脂肪源的半纯化饲料为基础饲料。在基础饲料中梯度添加维生素B2，首先将适量的维生素B2与微晶纤维素混合成一定浓度的维生素B2预混物，然后配制维生素B2 水平为0 mg·kg–1、4.4 mg·kg–1、6.2 mg·kg–1、8.0 mg·kg–1、11.3 mg·kg–1、15.5 mg·kg–1的6 种实验饲料(维生素B2 纯度为98%，Sigma，美国)，用微晶纤维素平衡维生素B2预混物的增减。6种饲料中维生素B2实测水平分别为0 mg·kg–1、4.4 mg·kg–1、6.2 mg·kg–1、8.0 mg·kg–1、11.3 mg·kg–1和15.5 mg·kg–1，饲料配方的组成及营养成分见表1。
项目 item 含量 content 项目 item 含量 content 原料 ingredient 矿物质预混料2 mineral premix 1 酪蛋白 (不含维生素) vitamin-free casein 20 磷酸二氢钙 monocalcium phosphate 1 大豆浓缩蛋白 soy protein concentrate 18 甜菜碱 betaine 1 鱼粉 fish meal 16 微晶纤维素 microystalline cellulose 3.5 面粉 wheat flour 23 合计 total 100 鱼油 fish oil 8 营养成分 nutrient component 大豆卵磷脂 soy lecithin 4 水分 moisture 7.66 氯化胆碱 choline chloride (50%) 2 粗蛋白 crude protein 45.23 乙氧基喹啉 ethoxyquin 0.5 粗脂肪 crude lipid 14.20 维生素预混料1 vitamin premix 2 灰分 ash 6.63 注：1. 维生素预混料 (mg·kg–1)：维生素A 32 mg，维生素D 5 mg，维生素E 120 mg，维生素K 10 mg，维生素C 2 000 mg，硫胺素 25 mg，D-泛酸钙 60 mg，烟酸 200 mg，吡哆醇 20 mg，叶酸 1.2 mg，生物素 32 mg，维生素B12 0.1 mg，肌醇 800 mg，乙氧喹150 mg，微晶纤维素 14 565 mg；2. 矿物质预混料(mg·kg–1 diet)：硫酸亚铁 160 mg，五水合硫酸铜 20 mg，硫酸锌100 mg，硫酸锰 120 mg，硫酸镁 2.4 g，磷酸二氢钙 6.0 g，氯化钠 200 mg，氯化钴(1%) 100 mg，氟化钠 4 mg，碘化钾 1.6 mg，沸石粉30.9 g[19] Note: 1. pyridoxine-free vitamin mixture (mg·kg–1 diet): vitamin A (500 000 IU) 32 mg, vitamin D (500 000 IU) 5 mg, vitamin E (50%) 120 mg, vitamin K 10 mg, vitamin C 2 000 mg, vitamin B1 25 mg, calcium pantothenate 60 mg, nicotinic acid 200 mg, vitamin B6 20 mg, folic acid 1.2 mg, biotin 32 mg, vitamin B12 0.1 mg, inositol 800 mg, ethoxyquin 150 mg, avicel 14 565 mg. 2. mineral premix (mg·kg–1 diet): FeSO4∙H2O 160 mg, CuSO4∙5H2O 20 mg, ZnSO4∙H2O 100 mg, MnSO4∙H2O 120 mg, MgSO4∙7H2O 2.4 g, Ca(H2PO4)2∙H2O 6.0 g, NaCl 200 mg, CoCl2∙6H2O (1%) 100 mg, NaF 4 mg, KI 1.6 mg, zelote power 30.9 g[19] 表 1 基础饲料组成及营养水平 (干质量)
Table 1. Composition and nutrient levels of basal diet (dry mass)
将鱼粉等颗粒较大的饲料原料用粉碎机粉碎过40目筛网。根据饲料配方准确称取各原料并充分混匀，期间少量组分采用逐级扩大混匀的方法加入。初步混匀后放入搅拌机(SZ250，广州旭众食品有限公司)搅拌10 min取出，再按比例加入鱼油和大豆卵磷脂，仔细搓碎至无较大团状物后过40目筛网，倒进搅拌机搅拌10 min，加入约40%的水后再搅拌5 min。然后用双螺杆挤条机(F-26，华南理工大学)挤压成直径为2.0 mm和2.5 mm2种规格的条状物，用造粒机(G-500，华南理工大学)制成沉性颗粒饲料。将制得的饲料在18 ℃空调房内晾干，置于4 ℃密封保存。
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本实验在中国水产科学研究院南海水产研究所深圳试验基地完成。养殖实验开始前，实验鱼停喂24 h，然后用丁香酚(成都艾科达化学试剂有限公司)麻醉，挑选体格健壮、大小均匀、平均初始体质量为(11.63±0.17) g的幼鱼450尾，随机分成6组，每组设置3个平行，放于18个网箱(1 m×1 m×1.2 m)，每个网箱25尾。实验开始后每天投喂2次(7:00和17:00)，表观饱食投喂，每天通过对池塘加、放水，置换5~10 cm高度的池塘水，连续充气，为期8周。实验期间详细记录每个网箱的采食量，如果在养殖过程中发现有实验鱼死亡，及时将死鱼捞出，称质量并做好记录。整个养殖过程中池塘水温为29.1~31.8 ℃，溶解氧为4.8~7.2 mg·L–1，盐度为15~18，pH为7.0~7.8。
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养殖实验结束后，实验鱼停食24 h，麻醉后称取各个网箱里实验鱼的总质量并记录尾数。从每个网箱中随机抽取3尾鱼用于全鱼粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分测定，– 20 ℃保存；取5尾测其体质量和体长并记录数据，然后尾静脉取血(注射器用1%的肝素钠润洗)，将所取得的血液注入离心管中，4 ℃条件静置2 h后离心(3 000 r·min–1，10 min)，取上清液，用于部分生化指标的检测。采血后，将实验鱼解剖并迅速分离出内脏和肝脏，称其质量后，收集肝脏样品保存于冻存管中，用于肝脏维生素含量和D-AAO活性的测定；血清、肝脏和肌肉于– 80 ℃保存备用。最后将解剖鱼去皮取20 g左右背部肌肉，– 20 ℃保存用于营养成分的测定。
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各指标的计算公式如下：
增重率(weight gain rate，WGR)=［终末均质量(g)－初始均质量(g)］/初始均质量(g)×100%
特定生长率(specific growth rate，SGR)=［ln终末均质量(g)－ln初始均质量(g)］/实验天数×100%
饲料系数(feed conversion ratio，FCR)=投喂饲料质量(g)/鱼体增加质量(g)
成活率(survival rate，SR)=终末尾数/初始尾数×100%
肝体比(hepatosomatic index，HSI)=肝脏质量(g)/鱼体质量(g)×100%
脏体比(viscerasomatic index，VSI)=内脏质量(g)/鱼体质量(g)×100%
肥满度(condition factor，CF)=体质量(g)/[体长(cm)]3
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全鱼和肌肉中的营养成分(水分、粗脂肪、粗蛋白及灰分)参照杜强[19]的方法进行测定。血清生化指标委托广州新海医院检验中心采用贝克曼全自动生化分析仪进行测定。血清免疫指标均采用试剂盒(南京建成生物工程研究所，江苏)进行测定。饲料和肝脏中维生素B2含量委托广东省食品工业研究所采用高效液相色谱法(GB/T 18397—2014)测定。肝脏D-AAO采用鱼D型氨基酸氧化酶酶联免疫分析(ELISA)试剂盒并采用双抗体夹心法进行测定。
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实验数据采用Excel 2007软件进行初步处理后通过SPSS 23.0软件进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)，以“平均值±标准差(
$\overline {{X}} $ ±SD)”表示，若出现显著性差异(P<0.05)再用Duncan氏法进行多重比较。将特定生长率和肝脏D-AAO活性作为评价指标，采用直线回归分析，通过折线法求得2条直线的相交点，确定卵形鲳鲹幼鱼对维生素B2的需要量。 -
随着饲料维生素B2水平的增加，卵形鲳鲹的末均质量、增重率和特定生长率先增加后趋于平缓，其中各实验组显著高于对照组(0 mg·kg–1，P<0.05)，其他各组间无显著差异 (P>0.05)，在4.4 mg·kg–1组出现最大值(表2)；肝体比先降低后升高，其中6.2 mg·kg–1、15.5 mg·kg–1组显著高于0 mg·kg–1、4.4 mg·kg–1组(P<0.05)；各组间饲料效率、脏体比、肥满度和成活率无显著差异(P>0.05)。
项目
itemw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 初均体质量/g initial body mass 11.50±0.14 11.75±0.11 11.72±0.15 11.54±0.04 11.70±0.22 11.56±0.22 末均体质量/g final body mass 41.63±5.60a 51.95±2.48b 51.05±2.37b 50.02±4.05b 50.44±1.62b 50.34±3.84b 采食量/g feed intake 1 156.34±77.96a 1 356.93±77.58b 1 175.58±60.52a 1 477.88±1144b 1 477.88±101.58b 1 427.92±83.93b 增重率/% WGR 262.37±52.35a 342.14±25.80b 335.72±16.67b 333.71±42.89b 336.14±21.44b 335.26±22.26b 特定生长率/% SGR 2.29±0.27a 2.65±0.10b 2.62±0.12b 2.62±0.03b 2.62±0.11b 2.62±0.14b 饲料系数 FCR 1.93±0.34 1.68±0.19 1.62±0.13 1.65±0.07 1.67±0.05 1.60±0.10 脏体比/% VSI 5.61±0.13 5.51±0.30 5.79±0.10 5.72±0.28 5.43±0.22 5.83±0.20 肝体比/% HSI 0.88±0.05a 0.84±0.04a 1.00±0.04b 0.94±0.09ab 0.91±0.05ab 0.87±0.01a 肥满度/g·cm3 CF 3.18±0.04 3.30±0.10 3.32±0.08 3.27±0.07 3.29±0.12 3.22±0.02 成活率/% SR 0.85±0.06 0.86±0.07 0.79±0.09 0.81±0.06 0.84±0.06 0.93±0.09 注：同一行数据上标字母不同表示差异显著(P<0.05)，后表同此 Note: Values with different superscript letters within the same row indicate significant difference (P<0.05). The same case in the following tables. 表 2 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼生长性能的影响
Table 2. Effects of dietary vitamin B2 content on growth performance of juvenile T. ovatus
根据饲料维生素B2水平与卵形鲳鲹特定生长率进行直线回归分析，以饲料中维生素B2水平为横坐标，卵形鲳鲹幼鱼特定生长率为纵坐标，得出y=0.082 6x+2.286 7 (R2=1)和y=–0.001 9x+2.644 2 (R2=0.421 2) 2个方程，求2条直线相交点值，得出饲料中维生素B2水平为4.23 mg·kg–1时卵形鲳鲹有最大特定生长率(图1)。
图 1 卵形鲳鲹幼鱼特定生长率与饲料维生素B2含量的关系
Figure 1. Relation between specific growth rate and dietary vitamin B2 content for juvenile T. ovatus
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0 mg·kg–1组和15.5 mg·kg–1组全鱼水分显著高于4.4 mg·kg–1、6.2 mg·kg–1、8.0 mg·kg–1组(P<0.05)；0 mg·kg–1、11.3 mg·kg–1、15.5 mg·kg–1组全鱼灰分含量显著高于4.4 mg·kg–1组(P<0.05，表3)；各组间全鱼蛋白和脂肪含量无显著差异(P>0.05)。6.2 mg·kg–1组肌肉蛋白显著高于 0 mg·kg–1组(P<0.05)，其他各组间无显著差异(P>0.05)；且对肌肉的水分、脂肪和灰分含量无显著影响(P>0.05)。
成分
componentw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 全鱼 whole body 水分 moisture 64.22±0.31b 63.50±0.43a 63.07±0.50a 63.32±0.47a 63.71±0.46ab 66.24±0.33b 粗蛋白质 crude protein 58.92±1.78 60.34±0.92 58.42±1.21 59.94±2.23 57.65±2.16 59.48±3.11 粗脂肪 crude fat 24.35±1.47 25.82±0.94 27.04±1.84 24.45±3.31 27.40±3.44 27.36±2.83 灰分 ash 15.33±0.49b 14.09±0.40a 14.68±0.50ab 14.62±0.52ab 14.99±0.38b 15.20±0.30b 肌肉 muscle 水分 moisture 72.25±2.13 72.84±2.97 72.34±2.11 71.94±1.84 73.28±1.70 72.74±1.50 粗蛋白质 crude protein 84.47±0.33a 85.04±0.82ab 82.89±0.69b 83.94±1.20ab 82.96±2.16ab 84.80±0.74ab 粗脂肪 crude fat 4.34±1.03 4.77±0.58 6.02±0.42 4.77±0.89 5.63±1.13 4.77±0.08 灰分 ash 7.15±0.30 6.77±0.44 6.76±0.63 6.90±0.13 7.07±0.17 7.02±0.04 表 3 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼全鱼和肌肉营养成分的影响 (干质量)
Table 3. Effects of dietary vitamin B2 content on nutritive components of whole fish and muscle of juvenile T. ovatus (dry mass)
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随着维生素B2水平的增加，血清葡萄糖含量、甘油三酯含量、谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性呈下降趋势(表4)；8.0 mg·kg–1、11.3 mg·kg–1、15.5 mg·kg–1组血清葡萄糖含量显著低于0 mg·kg–1组(P<0.05)，0 mg·kg–1、4.4 mg·kg–1和6.2 mg·kg–1组显著高于11.3 mg·kg–1、15.5 mg·kg–1组(P<0.05)，而4.4 mg·kg–1、6.2 mg·kg–1、8.0 mg·kg–1组之间无显著差异(P>0.05)；15.5 mg·kg–1组血清甘油三酯含量显著低于0 mg·kg–1、6.2 mg·kg–1组(P<0.05)，0 mg·kg–1、4.4 mg·kg–1、6.2 mg·kg–1、8.0 mg·kg–1、11.3 mg·kg–1组之间无显著差异(P>0.05)；维生素B2添加组的谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性显著低于0 mg·kg–1组(P<0.05)，各添加组间无显著差异(P>0.05)；0 mg·kg–1组总蛋白含量显著低于4.4 mg·kg–1、11.3 mg·kg–1组(P<0.05)，其他各组间无显著差异(P>0.05)；各组间总胆固醇含量无显著差异(P>0.05)。
指标
indexw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 葡萄糖/mmol·L–1 GLU 9.63±0.25c 9.18±0.17bc 9.28±0.60bc 8.79±0.05ab 8.41±0.35a 8.27±0.18a 总胆固醇/mmol·L–1 TCHO 3.40±0.26 3.79±0.27 3.61±0.17 3.76±0.13 3.76±0.13 3.68±0.54 甘油三酯/mmol·L–1 TG 0.92±0.10b 0.87±0.03ab 0.91±0.06b 0.90±0.06ab 0.84±0.14ab 0.74±0.10a 谷草转氨酶/U·L–1 AST 37.67±5.77b 27.00±4.36a 23.00±1.00a 29.00±1.00a 27.67±1.53a 23.00±1.73a 谷丙转氨酶/U·L–1 ALT 4.96±0.28b 3.33±0.58a 3.33±0.58a 3.33±0.58a 2.67±0.29a 2.78±0.69a 总蛋白/g·L–1 TP 20.56±0.48a 23.97±0.85c 21.47±0.45ab 21.80±1.93ab 22.67±1.27bc 21.30±0.10ab 表 4 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼血清生化指标的影响
Table 4. Effects of dietary vitamin B2 content on plasma biochemical indices of juvenile T. ovatus
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随着维生素B2水平的增加，血清溶菌酶活性、补体3的含量先增加后有较小幅度的降低，补体4的含量无明显变化，各组间溶菌酶活性、补体3和补体4含量差异不显著(P>0.05，表5)。
指标
indexw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 溶菌酶/U·mL–1 LZM 197.61±2.77 203.64±1.81 200.62±4.46 200.62±1.88 197.31±4.70 199.77±3.58 补体3/g·L–1 C3 2.94±0.05 2.98±0.08 3.08±0.10 3.03±0.08 2.95±0.07 3.04±0.05 补体4/g·L–1 C4 0.8±0.01 0.9±0.01 0.9±0.02 0.9±0.34 0.9±0.02 0.9±0.02 表 5 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼血清免疫指标的影响
Table 5. Effects of dietary vitamin B2 content on plasma immune parameters of juvenile T. ovatus
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随着饲料维生素B2水平的增加，肝脏维生素B2沉积量呈先增加后降低的趋势；各组之间无显著差异(P>0.05)；6.2 mg·kg–1组肝脏D-AAO活性显著高于0 mg·kg–1组(P<0.05)，其他各组间无显著差异(P>0.05，表6)。
指标
indexw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 肝脏维生素B2含量/mg·kg–1 liver vitamin B2 content 4.50±0.18 4.59±0.13 4.96±0.41 4.74±0.47 4.72±0.23 4.74±0.26 肝脏D-AAO活性/IU·L–1 liver D-amino acid oxidase activity 258.79±55.87a 305.01±8.12ab 337.70±1.74b 329.15±1.36ab 283.17±65.19ab 284.24±27.53ab 表 6 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼肝脏维生素B2含量和肝脏D-氨基酸氧化酶活性的影响
Table 6. Effects of dietary vitamin B2 content on liver vitamin B2 content and D-amino acid oxidase activity of juvenile T. ovatus
以饲料维生素B2水平为横坐标、肝脏D-AAO活性为纵坐标进行直线回归，得出方程y=12.338x+256.99 (R2=0.980 1)和y=–6.353 1x+373.7 (R2=0.806 8)，求2条直线相交点值，得出饲料维生素B2水平为6.24 mg·kg–1时卵形鲳鲹幼鱼肝脏D-AAO活性最大(图2)。
图 2 维生素B2 含量对卵形鲳鲹幼鱼肝脏D-氨基酸氧化酶活性的关系
Figure 2. Relation of dietary vitamin B2 content and liver D-amino acid oxidase activity of juvenile T. ovatus
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早期大量研究发现，当饲料中缺乏维生素B2时，鱼类会出现一种或多种缺乏症。在本实验中，各处理组均未发现明显的维生素B2缺乏症，此结果与对吉富罗非鱼[6]、异育银鲫[10]和团头鲂[11]的研究结果相似。在幼建鲤[17]的研究中发现，随着维生素B2水平的提高幼建鲤增重率和特定生长率显著提高，与本实验结果一致。依据卵形鲳鲹的特定生长率和饲料中的维生素B2含量进行直线回归分析，得出维生素B2含量为4.23 mg·kg–1时卵形鲳鲹获得最佳生长，此结果与异育银鲫(3.76 mg·kg–1)[10]、杂交条纹鲈(4.10 mg·kg–1)[12]、幼建鲤(4.22 mg·kg–1)[17]的最适生长需要量相近。此外在对草鱼[7]的研究中发现，维生素B2不足时，草鱼幼鱼会出现生长不良、饲料效率下降和死亡率升高等现象。本实验结果显示，维生素B2对卵形鲳鲹幼鱼的饲料效率和成活率无显著影响，其原因可能是养殖水体中的维生素以及实验鱼体内积累的维生素B2延缓了缺乏症的出现。因此维生素的需要量可能与多种因素有关，如鱼的种类、实验鱼的规格、养殖环境、饲料的质量、养殖周期等。
在本实验中，饲料中维生素B2水平的提高对卵形鲳鲹全鱼水分、灰分和肌肉粗蛋白含量有显著影响，对全鱼粗蛋白和脂肪含量无显著影响。关于维生素B2对全鱼粗脂肪、粗蛋白、水分和灰分含量影响的报道不尽相同。饲料中维生素B2含量对草鱼[20]全鱼的粗营养成分均无显著影响；对团头鲂[11]全鱼水分、粗蛋白、粗灰分的含量无显著影响；对异育银鲫[10]全鱼水分和粗蛋白的含量也无显著影响，而对全鱼粗灰分的含量有显著影响；然而，在吉富罗非鱼[6]、草鱼[7]的研究中发现，饲料中维生素B2水平对全鱼粗脂肪有显著影响。根据以上研究结果可以看出，不同的实验对象和同一实验对象不同研究环境所呈现出的结果均有很大差异，研究结果的差异可能是实验对象和实验条件所致。
维生素B2参与生物体脂肪的代谢过程，对脂质过氧化具有抑制作用，并可降低血清总胆固醇及甘油三酯的含量[21]。本实验表明，饲料中添加维生素B2血清甘油三酯的含量显著降低，此结果与蒋明等[6]的报道相吻合。谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性的大小通常被用作肝脏和肾脏损伤的重要检测指标[22]。当动物肝脏受到损害并导致肝细胞破裂，肝细胞中的谷草转氨酶及谷丙转氨酶会释放到血液中，血液中这2种转氨酶的含量将会增加[23]。在本实验中，0 mg·kg–1组谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著高于添加组，这与在小鼠(Mus musculus)中的研究结果一致[24]。说明饲料中适量的维生素B2水平有利于肝功能的正常发挥。血清中的总蛋白含量与机体蛋白质代谢水平密切相关[25]。
血清免疫指标通常能够反映机体对病原微生物的抵御能力。溶菌酶可以攻击细菌细胞壁的肽聚糖，并作为非特异性天然免疫分子来对抗有害细菌的入侵[26]。Niu等[27]在对亚成年大菱鲆(Scophthalmus maximus)的研究中发现，添加维生素E能显著增加补体的含量和溶菌酶活性。在本实验中，随着饲料中维生素B2水平的提高，对血清溶菌酶活性、补体3及补体4的含量没有显著影响，可能由于卵形鲳鲹的非特异免疫系统对维生素B2不敏感。
在维生素需要量研究中通常把肝脏中维生素含量作为评价指标[28]。本研究发现，随着饲料中维生素B2水平的提高，肝脏中维生素B2的含量先增加后趋于稳定，在6.2 mg·kg–1组出现最大值，但是各组间无显著性差异。在以往的实验中发现，以肝脏维生素B2含量作为评价指标，吉富罗非鱼最适需要量为19.3 mg·kg–1[6]，团头鲂为4.65 mg·kg–1[11]。且肝脏维生素B2含量并未随维生素B2水平的增加而增加，说明鱼的种类不同会导致肝脏维生素B2积蓄量变化趋势的差异，同时也表明维生素B2不会在肝脏中积累。
维生素B2在体内以黄素单核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD) 2种形式参与氧化还原反应，FMN和FAD又作为D-AAO的辅酶。组织酶活性即D-AAO活性是维生素B2需要量研究中更为敏感的一个指标[29-30]。在本实验中，以肝脏D-AAO活性判断时，卵形鲳鲹对维生素B2的最适需要量为6.24 mg·kg–1，与虹鳟[16]、鲈鱼[8]、斑点叉尾鮰[14]的研究结果基本一致。
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在本研究的实验条件下，饲料中维生素B2水平能够显著提高卵形鲳鲹的生长性能，卵形鲳鲹获得最大特定生长率时，维生素B2的需要量为4.23 mg·kg–1；以肝脏D-AAO活性为评价指标时，卵形鲳鲹幼鱼对维生素B2的需要量为6.24 mg·kg–1。
卵形鲳鲹幼鱼对维生素B2的需要量
Vitamin B2 requirement of juvenile golden pompano (Trachinotus ovatus)
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摘要: 为研究卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼对饲料中维生素B2的最适需要量，配制维生素B2水平为0 mg·kg–1、4.4 mg·kg–1、6.2 mg·kg–1、8.0 mg·kg–1、11.3 mg·kg–1、15.5 mg·kg–1的6种实验饲料，每种饲料设3个平行，每个平行放25尾初始均质量为(11.63±0.17) g的卵形鲳鲹幼鱼，每日2次饱食，投喂8周。结果显示，4.4 mg·kg–1组幼鱼的增重率、特定生长率均显著高于0 mg·kg–1组(P<0.05)，血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性显著低于0 mg·kg–1组(P<0.05)，但饲料中维生素B2水平对饲料系数、成活率、肝脏维生素B2含量、血清免疫指标、全鱼粗脂肪和粗蛋白、肌肉水分、粗脂肪和灰分均无显著影响(P>0.05)；6.2 mg·kg–1组肝脏D-氨基酸氧化酶(D-AAO)活性显著高于0 mg·kg–1组(P<0.05)。折线模型分析显示，卵形鲳鲹获得最佳生长和肝脏D-AAO活力达到最大时对饲料中维生素B2的需要量分别为4.23 mg·kg–1和6.24 mg·kg–1。Abstract: To determine the optimal dietary vitamin B2 requirement of juvenile golden pompano (Trachinotus ovatus), six experimental diets were formulated which contained 0 mg·kg–1, 4.4 mg·kg–1, 6.2 mg·kg–1, 8.0 mg·kg–1, 11.3 mg·kg–1 and 15.5 mg·kg–1 of vitamin B2. Each diet was assigned to three parallels of 25 fish [initial mass of (11.63±0.17) g] which were fed twice daily for eight weeks. The results show that the weight gain rate and specific growth rate of the fish fed with diet of 4.4 mg·kg–1 vitamin B2 were significantly higher than those of 0 mg·kg–1 group (P<0.05), and the activities of aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase in the serum were significantly lower than those in 0 mg·kg–1 group (P<0.05). No significant effect was found on the fish coefficient, survival rate, liver vitamin B2 content, serum immune parameters, crude protein and crude fat content in whole body, moisture, crude fat and crude ash in muscle (P>0.05); the liver D-AAO activity in 6.2 mg·kg–1 group was significantly higher in 0 mg·kg–1 group (P<0.05). Broken-line model analysis estimates that the dietary vitamin B2 requirement of juvenile golden pompano is 4.23 mg·kg–1 for optimal growth, and 6.24 mg·kg–1 for maximum liver D-AAO activity.
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Key words:
- Trachinotus ovatus /
- vitamin B2 /
- requirement /
- growth /
- D-amino acid oxidase
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图 1 卵形鲳鲹幼鱼特定生长率与饲料维生素B2含量的关系
Figure 1. Relation between specific growth rate and dietary vitamin B2 content for juvenile T. ovatus
图 2 维生素B2 含量对卵形鲳鲹幼鱼肝脏D-氨基酸氧化酶活性的关系
Figure 2. Relation of dietary vitamin B2 content and liver D-amino acid oxidase activity of juvenile T. ovatus
表 1 基础饲料组成及营养水平 (干质量)
Table 1. Composition and nutrient levels of basal diet (dry mass)
项目 item 含量 content 项目 item 含量 content 原料 ingredient 矿物质预混料2 mineral premix 1 酪蛋白 (不含维生素) vitamin-free casein 20 磷酸二氢钙 monocalcium phosphate 1 大豆浓缩蛋白 soy protein concentrate 18 甜菜碱 betaine 1 鱼粉 fish meal 16 微晶纤维素 microystalline cellulose 3.5 面粉 wheat flour 23 合计 total 100 鱼油 fish oil 8 营养成分 nutrient component 大豆卵磷脂 soy lecithin 4 水分 moisture 7.66 氯化胆碱 choline chloride (50%) 2 粗蛋白 crude protein 45.23 乙氧基喹啉 ethoxyquin 0.5 粗脂肪 crude lipid 14.20 维生素预混料1 vitamin premix 2 灰分 ash 6.63 注：1. 维生素预混料 (mg·kg–1)：维生素A 32 mg，维生素D 5 mg，维生素E 120 mg，维生素K 10 mg，维生素C 2 000 mg，硫胺素 25 mg，D-泛酸钙 60 mg，烟酸 200 mg，吡哆醇 20 mg，叶酸 1.2 mg，生物素 32 mg，维生素B12 0.1 mg，肌醇 800 mg，乙氧喹150 mg，微晶纤维素 14 565 mg；2. 矿物质预混料(mg·kg–1 diet)：硫酸亚铁 160 mg，五水合硫酸铜 20 mg，硫酸锌100 mg，硫酸锰 120 mg，硫酸镁 2.4 g，磷酸二氢钙 6.0 g，氯化钠 200 mg，氯化钴(1%) 100 mg，氟化钠 4 mg，碘化钾 1.6 mg，沸石粉30.9 g[19] Note: 1. pyridoxine-free vitamin mixture (mg·kg–1 diet): vitamin A (500 000 IU) 32 mg, vitamin D (500 000 IU) 5 mg, vitamin E (50%) 120 mg, vitamin K 10 mg, vitamin C 2 000 mg, vitamin B1 25 mg, calcium pantothenate 60 mg, nicotinic acid 200 mg, vitamin B6 20 mg, folic acid 1.2 mg, biotin 32 mg, vitamin B12 0.1 mg, inositol 800 mg, ethoxyquin 150 mg, avicel 14 565 mg. 2. mineral premix (mg·kg–1 diet): FeSO4∙H2O 160 mg, CuSO4∙5H2O 20 mg, ZnSO4∙H2O 100 mg, MnSO4∙H2O 120 mg, MgSO4∙7H2O 2.4 g, Ca(H2PO4)2∙H2O 6.0 g, NaCl 200 mg, CoCl2∙6H2O (1%) 100 mg, NaF 4 mg, KI 1.6 mg, zelote power 30.9 g[19] 
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表 2 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼生长性能的影响
Table 2. Effects of dietary vitamin B2 content on growth performance of juvenile T. ovatus
项目
itemw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 初均体质量/g initial body mass 11.50±0.14 11.75±0.11 11.72±0.15 11.54±0.04 11.70±0.22 11.56±0.22 末均体质量/g final body mass 41.63±5.60a 51.95±2.48b 51.05±2.37b 50.02±4.05b 50.44±1.62b 50.34±3.84b 采食量/g feed intake 1 156.34±77.96a 1 356.93±77.58b 1 175.58±60.52a 1 477.88±1144b 1 477.88±101.58b 1 427.92±83.93b 增重率/% WGR 262.37±52.35a 342.14±25.80b 335.72±16.67b 333.71±42.89b 336.14±21.44b 335.26±22.26b 特定生长率/% SGR 2.29±0.27a 2.65±0.10b 2.62±0.12b 2.62±0.03b 2.62±0.11b 2.62±0.14b 饲料系数 FCR 1.93±0.34 1.68±0.19 1.62±0.13 1.65±0.07 1.67±0.05 1.60±0.10 脏体比/% VSI 5.61±0.13 5.51±0.30 5.79±0.10 5.72±0.28 5.43±0.22 5.83±0.20 肝体比/% HSI 0.88±0.05a 0.84±0.04a 1.00±0.04b 0.94±0.09ab 0.91±0.05ab 0.87±0.01a 肥满度/g·cm3 CF 3.18±0.04 3.30±0.10 3.32±0.08 3.27±0.07 3.29±0.12 3.22±0.02 成活率/% SR 0.85±0.06 0.86±0.07 0.79±0.09 0.81±0.06 0.84±0.06 0.93±0.09 注：同一行数据上标字母不同表示差异显著(P<0.05)，后表同此 Note: Values with different superscript letters within the same row indicate significant difference (P<0.05). The same case in the following tables.
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表 3 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼全鱼和肌肉营养成分的影响 (干质量)
Table 3. Effects of dietary vitamin B2 content on nutritive components of whole fish and muscle of juvenile T. ovatus (dry mass)
成分
componentw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 全鱼 whole body 水分 moisture 64.22±0.31b 63.50±0.43a 63.07±0.50a 63.32±0.47a 63.71±0.46ab 66.24±0.33b 粗蛋白质 crude protein 58.92±1.78 60.34±0.92 58.42±1.21 59.94±2.23 57.65±2.16 59.48±3.11 粗脂肪 crude fat 24.35±1.47 25.82±0.94 27.04±1.84 24.45±3.31 27.40±3.44 27.36±2.83 灰分 ash 15.33±0.49b 14.09±0.40a 14.68±0.50ab 14.62±0.52ab 14.99±0.38b 15.20±0.30b 肌肉 muscle 水分 moisture 72.25±2.13 72.84±2.97 72.34±2.11 71.94±1.84 73.28±1.70 72.74±1.50 粗蛋白质 crude protein 84.47±0.33a 85.04±0.82ab 82.89±0.69b 83.94±1.20ab 82.96±2.16ab 84.80±0.74ab 粗脂肪 crude fat 4.34±1.03 4.77±0.58 6.02±0.42 4.77±0.89 5.63±1.13 4.77±0.08 灰分 ash 7.15±0.30 6.77±0.44 6.76±0.63 6.90±0.13 7.07±0.17 7.02±0.04
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表 4 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼血清生化指标的影响
Table 4. Effects of dietary vitamin B2 content on plasma biochemical indices of juvenile T. ovatus
指标
indexw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 葡萄糖/mmol·L–1 GLU 9.63±0.25c 9.18±0.17bc 9.28±0.60bc 8.79±0.05ab 8.41±0.35a 8.27±0.18a 总胆固醇/mmol·L–1 TCHO 3.40±0.26 3.79±0.27 3.61±0.17 3.76±0.13 3.76±0.13 3.68±0.54 甘油三酯/mmol·L–1 TG 0.92±0.10b 0.87±0.03ab 0.91±0.06b 0.90±0.06ab 0.84±0.14ab 0.74±0.10a 谷草转氨酶/U·L–1 AST 37.67±5.77b 27.00±4.36a 23.00±1.00a 29.00±1.00a 27.67±1.53a 23.00±1.73a 谷丙转氨酶/U·L–1 ALT 4.96±0.28b 3.33±0.58a 3.33±0.58a 3.33±0.58a 2.67±0.29a 2.78±0.69a 总蛋白/g·L–1 TP 20.56±0.48a 23.97±0.85c 21.47±0.45ab 21.80±1.93ab 22.67±1.27bc 21.30±0.10ab
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表 5 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼血清免疫指标的影响
Table 5. Effects of dietary vitamin B2 content on plasma immune parameters of juvenile T. ovatus
指标
indexw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 溶菌酶/U·mL–1 LZM 197.61±2.77 203.64±1.81 200.62±4.46 200.62±1.88 197.31±4.70 199.77±3.58 补体3/g·L–1 C3 2.94±0.05 2.98±0.08 3.08±0.10 3.03±0.08 2.95±0.07 3.04±0.05 补体4/g·L–1 C4 0.8±0.01 0.9±0.01 0.9±0.02 0.9±0.34 0.9±0.02 0.9±0.02
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表 6 饲料中维生素B2 水平对卵形鲳鲹幼鱼肝脏维生素B2含量和肝脏D-氨基酸氧化酶活性的影响
Table 6. Effects of dietary vitamin B2 content on liver vitamin B2 content and D-amino acid oxidase activity of juvenile T. ovatus
指标
indexw(维生素B2)/mg·kg–1 dietary vitamin B2 content 0 4.4 6.2 8.0 11.3 15.5 肝脏维生素B2含量/mg·kg–1 liver vitamin B2 content 4.50±0.18 4.59±0.13 4.96±0.41 4.74±0.47 4.72±0.23 4.74±0.26 肝脏D-AAO活性/IU·L–1 liver D-amino acid oxidase activity 258.79±55.87a 305.01±8.12ab 337.70±1.74b 329.15±1.36ab 283.17±65.19ab 284.24±27.53ab
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